液相色譜C18預柱的規范使用方法分享

更新時間：2025-10-14

瀏覽次數：125

　　在高效液相色譜（HPLC）與超高效液相色譜（UHPLC）分析中，液相色譜C18預柱守護著昂貴的分析柱，攔截樣品中的顆粒物、強保留雜質與基質成分，延長主柱壽命，保障分離效果的穩定性。然而，不當使用不僅無法發揮其保護作用，反而可能引入死體積、增加背壓，甚至污染系統。掌握科學、規范的使用方法，是讓液相色譜C18預柱提升色譜系統整體性能的關鍵。

　　一、選型匹配

　　固定相匹配：

　　預柱填料必須與分析柱一致（如C18），避免因化學性質差異導致峰形畸變或保留時間漂移。

　　粒徑與孔徑匹配：

　　預柱粒徑（如5μm）應≤分析柱粒徑，孔徑（如120?）相同，確保流動相與樣品兼容。

　　柱規格選擇：

　　內徑：通常2.1mm或4.6mm，與分析柱匹配；

　　長度：10-20mm，過長增加背壓，過短保護不足。

　　二、安裝規范

　　位置選擇：

　　安裝于自動進樣器與分析柱之間，確保所有樣品先經預柱過濾；

　　若使用柱溫箱，預柱應與分析柱同溫。

　　連接方式：

　　使用零死體積接頭或預柱卡套，避免產生額外死體積，影響峰形；

　　接頭擰緊力度適中，防止過緊損壞螺紋或過松導致泄漏。

　　方向確認：

　　預柱有明確流向標記（→），必須與流動相方向一致，不可反接。

　　三、使用前活化

　　目的：

　　去除預柱內保存液（通常為有機相），潤濕填料，確保良好潤濕性。

　　步驟：

　　以低流速（如0.2mL/min）用強溶劑（如甲醇或乙腈）沖洗10-15分鐘；

　　再用初始流動相平衡15-30分鐘，直至壓力穩定、基線平穩。

　　四、樣品處理

　　樣品前處理：

　　所有樣品必須經0.22μm或0.45μm濾膜過濾，去除顆粒物；

　　復雜基質（如血清、組織提取液）建議進行蛋白沉淀、液液萃取或SPE凈化，減少強保留雜質。

　　進樣量控制：

　　避免超載，通常≤20μL，防止預柱過早飽和。

　　五、運行監控

　　壓力監測：

　　定期觀察系統背壓，若壓力異常升高（如上升>15%），提示預柱堵塞。

　　色譜性能：

　　若出現峰形拖尾、保留時間漂移或基線波動，可能預柱污染或失效。

　　更換信號：

　　壓力持續升高，經沖洗無效；

　　分離效果明顯下降，且排除其他原因。